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全自動(dòng)酶免儀的應(yīng)用體會(huì)與技巧

上海聯(lián)碩生物科技有限公司

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）以操作簡便、技術(shù)可靠、試劑方便易得等優(yōu)勢，在醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室中已被廣泛應(yīng)用。特別是從二十世紀(jì)九十年代開始，ELISA的靈敏度和特異性以及檢測過程的自動(dòng)化程度得到顯著提高和改善，ELISA從而成為檢測傳染病血清學(xué)（病毒性肝炎、艾滋病等）、腫瘤標(biāo)志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)的主要技術(shù)。
        隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展，ELISA將更多地參與診斷、治療及療效的判斷，其技術(shù)已從手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)朝多功能、多用途聯(lián)用流水線發(fā)展，全自動(dòng)酶免分析儀正在世界各種實(shí)驗(yàn)室普及。鑒于以上，我院于2002年12月從意大利SEAC公司購進(jìn)一臺(tái)ALISEI全自動(dòng)酶免分析儀，配以上?？迫A公司ELISA試劑，經(jīng)一年的使用、觀察與對比，體會(huì)如下：

        一、測試程序編輯

        ALISEI提供的英文控制軟件，可方便用戶針對每項(xiàng)檢測項(xiàng)目，按其操作說明簡便而具體地進(jìn)行編程，并可作測試前預(yù)稀釋工作編輯；并靈活地對操作步驟加以適當(dāng)?shù)卣{(diào)整（例：上?？迫A公司提供的檢測HEV-IgM和HEV-IgG試劑盒，HEV-IgM加樣時(shí)只需加50μl血清，而HEV-IgG加樣時(shí)需100μl樣品稀釋液和10μl血清，用戶可利用軟件提供的Disp Regent+┄功能使100μl樣品稀釋液和10μl血清一步完成，從而使以上兩項(xiàng)檢測項(xiàng)目的操作步驟達(dá)到一致，可以在同一塊微孔板進(jìn)行測試）。另對于兩種操作步驟相似的測試項(xiàng)目，用戶利用COPY（復(fù)制）功能，復(fù)制一個(gè)源程序并稍加修改，即可得到一個(gè)與源程序步驟相似的程序，從而簡便了操作程序的編輯。

        另以上?？迫A公司生產(chǎn)的乙肝二對半檢測試劑（立可讀）為例：如果實(shí)驗(yàn)室當(dāng)天的乙肝二對半檢測量小于44人份，則占用ALISEI的三塊板；如果多于44人份，則占用ALISEI的五塊板。筆者將HBsAg的檢測程序復(fù)制為HBsAg1、 HBsAg2、 HBsAg3，進(jìn)行人為拼板，即HBsAg-HBsAb為一塊板、HBeAg-HBsAg1為一塊板，等拼為四塊板，這樣就可以在占用ALISEI四塊板的基礎(chǔ)上同一批檢測多至68人份的乙肝二對半。

        二、檢測流程圖

        每天開機(jī)后，用戶按當(dāng)天的標(biāo)本量添加病人資料，軟件即自動(dòng)編輯，進(jìn)行時(shí)間優(yōu)化管理，zui終生成TMS（時(shí)間管理系統(tǒng)）圖。但有時(shí)TMS所提供的流程圖并不能使用戶滿意，用戶可以利用軟件提供的SWAP（位置互換）功能，對相應(yīng)的測試項(xiàng)目的檢測序號(hào)進(jìn)行互換，以期望得到滿意的TMS圖。所以建議用戶在編輯測試程序時(shí)，將步驟繁瑣的測試項(xiàng)目序號(hào)靠前。

        三、防止交叉污染

        經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心測試證明：ALISEI的設(shè)計(jì)攜帶污染率<1ppm，實(shí)際攜帶污染率<0.1ppm[1]。
        近一段時(shí)間發(fā)現(xiàn)，每天檢測結(jié)果中乙肝二對半HBsAg檢測板*、第二板條本底偏高。經(jīng)仔細(xì)觀察每天的時(shí)間優(yōu)化管理?xiàng)l帶，發(fā)現(xiàn)儀器加樣針分配好抗HCV酶標(biāo)二抗后，即進(jìn)行HBsAg顯色劑的分配工作。筆者懷疑是否由于抗HCV酶標(biāo)二抗的*附著力引起痕量污染。筆者隨即對抗HCV的操作步驟稍加修改：即在加入酶標(biāo)二抗后，插入兩步洗滌液灌注、沖洗加樣針程序。經(jīng)過測試，發(fā)現(xiàn)乙肝二對半HBsAg檢測板*、第二板條本底偏高問題已得到解決。

        當(dāng)然，筆者認(rèn)為插入的兩步灌注、沖洗加樣針程序，如果改作*步為終止液灌注、沖洗，第二步為洗滌液灌注、沖洗，效果將更加明確。從以上實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，作為檢驗(yàn)人員，不能拘泥于全自動(dòng)分析儀所固有的操作模式，應(yīng)發(fā)揮人的主觀能動(dòng)性，使機(jī)器更好地為人服務(wù)。

        四、讀數(shù)系統(tǒng)

        ALISEI采用的8光纖三波長讀數(shù)，去除測試過程中包括微孔板劃痕在內(nèi)的一切干擾，使結(jié)果更準(zhǔn)確可靠，zui大線性范圍OD值可達(dá)9.0。

        五、測試項(xiàng)目

        ALISEI除了定性試驗(yàn)，還可做定量試驗(yàn)、親和力試驗(yàn)、過敏原檢測等。

        六、不足之處

        1. ALISEI提供6塊板、12個(gè)項(xiàng)目同時(shí)在線檢測，但對于開展多于12個(gè)項(xiàng)目檢測的實(shí)驗(yàn)室就凸顯不足。廠方已聽取了廣大用戶的要求，在新提供的控制軟件版本中，作出相應(yīng)修改：可提供6塊板、16個(gè)項(xiàng)目同時(shí)在線檢測。

        2. 由于目前的一些檢測項(xiàng)目（例：類風(fēng)濕因子分型檢測）需用OPD（鄰苯二胺）顯色，而OPD顯色液穩(wěn)定性差，需臨時(shí)配制，并需要在半小時(shí)內(nèi)應(yīng)用；而ALISEI在工作時(shí)是全封閉進(jìn)行。若將此類項(xiàng)目用ALISEI檢測，勢必要在中途將儀器暫停，放入顯色液，這將帶來諸多麻煩。

        綜上所述，引進(jìn)ALISEI全自動(dòng)酶免儀不僅能提高工作效率，還能節(jié)約勞動(dòng)力，使酶免試驗(yàn)的質(zhì)量管理更加規(guī)范，并使ELISA的精密度、靈敏度、特異性同時(shí)有所提高，能真正實(shí)現(xiàn)酶免實(shí)驗(yàn)室的自動(dòng)化和網(wǎng)絡(luò)化。

        參考文獻(xiàn)：
        [1] ALISEI全自動(dòng)酶免分析儀質(zhì)量測試:W（X-040-2001）. 國家藥品監(jiān)督管理局北京醫(yī)療器械質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心.